芦荟组织培养快速繁殖技术

芦荟为百合科芦荟属多年生常绿肉质草本植物。近年来，由于对芦荟化学和药理学研究的深入，在世界范围内形成了芦荟保健热。芦荟的栽培业在我国也开始兴起，但由于芦荟不能自花授粉结果，用种子繁殖非常困难。目前的繁殖方式主要是分枝和分蘖，但难以快速大量繁殖幼苗，这也是目前芦荟育苗价格昂贵的重要原因之一。本文介绍了一种在芦荟茎尖组织培养试管苗快速繁殖技术。利用该技术，可在短时间内繁殖出数百万株幼苗，具有成本低、效益高的特点。

一、材料与介质

l0-l5cm

高大的芦荟幼苗

;

愈伤组织诱导培养基是

多发性硬化症+（1

一

6毫克/

L)BA+(0.1

一

0.5mg/L)NAA；

分化培养基是

MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA；

生根介质是

MS+(0.1

一

0.5 毫克/升) IBA+(2

一

5毫克/升)PP33

.

2、养殖方法

(

一

)

愈伤组织培养

将准备好的芦荟幼苗用清水冲洗几次，切掉叶子和大部分茎，取茎尖，再次冲洗

1-2

二、淋。在超净工作台上，第一次使用

75%

乙醇浸泡芽尖

30-60s

, 然后浸入氯化汞

5-l0min

，最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀去除包括枝条顶端生长点的组织切片并接种在愈伤组织诱导培养基上。培养条件是

:

日光

10-12小时

, 照度为

1000

一

2000Lx

，温度

(25

学者

)2

。关于

15-25天

之后，接种在试管中的外植体即可膨胀形成愈伤组织。愈伤组织的形成标志着接种外植体的生长状态已经脱离分化状态，开始恢复分生能力。愈伤组织形成

1个

一周后，可将愈伤组织转移至试管中进行继代培养或分化培养。

(

二

)

亚文化

在无菌条件下将愈伤组织从试管中取出，用镊子和手术刀去除附着在愈伤组织上的培养基，用无菌水清洗数次，直至愈伤组织上无残留培养基。用手术刀将愈伤组织切成若干小块，然后接种到含有愈伤组织诱导培养基的锥形瓶中，在与愈伤组织诱导相同的培养条件下继续培养。几天后，三角瓶中的小愈伤组织就能逐渐长大。这个过程称为继代培养，可以重复操作。通过愈伤组织继代培养，原接种

1个

可以从单个芦荟茎尖组织繁殖出大量新的接种材料用于分化培养。

(

三

)

差异化文化

在无菌条件下，将愈伤组织从试管或烧瓶中取出，用无菌水清洗，切成接种小片，接种到装有分化培养基的烧瓶中。分化培养条件同愈伤组织培养。关于

30-50天

之后，愈伤组织可以分化出芽，继续长出小叶。当分化的苗长到一定高度或已分化到一定数量时，将这些小苗在无菌条件下取出进行生根培养或再诱导分化。

(

四

)

植根文化

当三角瓶中幼苗的叶子长到

3厘米

左右时，在无菌条件下取出幼苗，放入盛有生根培养基的三角瓶中培养，培养条件同分化培养。约半个月后，幼苗即可生根。

(

五

)

苗木硬化

当幼苗的根长到

当长度固定时，幼苗已经很壮了。取出幼苗，用清水洗去附着在根部的介质

(

注意

:

一定要洗干净，不然会烂根

)

.整理洗净的苗，喷上清水，

15-25

、湿度

60%-80%

条件下的幼苗硬化

24小时

, 也可以简化为

l2h

.

(

六

)

移植

硬化后，将幼苗移栽到由蛭石组成的驯化苗圃中进行驯化，每天定时喷洒驯化培养液和清水，约

15-20天

最后，根据幼苗的生长情况，将其移植到苗圃中。

三、注意事项

1个

1、配制培养基时，严格准确称取各种化学试剂。培养基中的蔗糖可用市售白糖代替，从而降低成本。高压灭菌条件是

120

摄氏度，

1.5公斤/厘米

2个

,

3Omin

.每次接种前应对接种室进行甲醛熏蒸和紫外线消毒。

2个

2、培养过程中，如有细菌污染，应立即倒出被污染的试管或烧瓶中的培养物，并将试管或烧瓶洗净晾干备用。对于愈伤组织或试管苗生长良好的试管或培养瓶，只有部分被细菌污染，也可在无菌条件下取出愈伤组织或试管苗，放回试管或培养瓶中包含相应的介质。在锥形瓶中，继续培养。

3个

, 苗苗硬化后，也可以将试管苗浸泡在溶有生根粉的清水中

1-2小时

，然后移植到驯化苗圃。在驯化过程中，除注意环境湿度、温度和光照外，还应注意预防各种病虫害的发生。芦荟的害虫主要是红蜘蛛和蚜虫，可以喷药

40%

氧化乐果霜

1200

双液控。芦荟主要病害是黑斑病，可以喷药

50%

多菌灵可湿性粉剂

1000

双液控。